TECHNICAL COLUMN
技术专栏PCR的原理:DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解 链成单链,在DNA聚合酶的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。在实验中 发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度 变化控制DNA的变性和复性,加入设计引物,DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复 制。
PCR体系和方法:PCR管加热使模板变性, 退火使引物 与模板DNA互补,延伸需将反应温度升至 中温( 72℃),在Tap多聚酶的作用下,以 dNTP为原料,以引物为复制的起点,合成 新链。如此重复改变反应温度,即高温变性、 低温退火和中温延伸三个阶段为一个循 环,每一次循环使特异区段的基因拷贝数 放大一倍,一般样品是经过30次循环,最终 使基因放大了数百万倍; 将扩增产物进行 电泳,经溴化乙锭染色,在紫外灯照射下肉 眼能见到扩增特异区段的DNA带。
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